一、前期準(zhǔn)備

 

　　設(shè)備檢查

 

　　在開始實驗前，仔細(xì)檢查所有器械是否完好無損，包括顱骨鉆孔器、微注射泵、顯微手術(shù)器械套裝、立體定位儀和溫度控制系統(tǒng)等。確認(rèn)各部件功能正常，避免因設(shè)備故障影響實驗進(jìn)程。

 

　　材料準(zhǔn)備

 

　　準(zhǔn)備好所需的耗材，如注射器、針頭、消毒劑、固定適配器等，并確保它們已進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏缇幚?。對于涉及藥物注射的實驗，提前?zhǔn)備好所需藥物并標(biāo)注清楚劑量和濃度。

 

　　環(huán)境控制

 

　　確保實驗室環(huán)境符合實驗要求，特別是溫度和濕度的控制。為小動物提供適宜的環(huán)境溫度，防止應(yīng)激反應(yīng)對實驗結(jié)果的影響。

 

　　二、動物麻醉與固定

 

　　麻醉處理

 

　　根據(jù)實驗設(shè)計選擇合適的麻醉藥物及劑量，通常采用異氟烷等。確保麻醉深度適中，既能使動物處于穩(wěn)定狀態(tài)，又不會過度抑制呼吸和心跳。

 

　　立體定位儀固定

 

　　將麻醉后的大小鼠放置在立體定位儀上，使用耳棒和鼻夾固定頭部位置。調(diào)整三維坐標(biāo)系統(tǒng)，使目標(biāo)腦區(qū)位于操作視野中心。

 

　　三、顱骨鉆孔

 

　　標(biāo)記鉆孔位置

 

　　使用標(biāo)記筆在顱骨表面標(biāo)出預(yù)定鉆孔位置，參照標(biāo)準(zhǔn)腦圖譜確定目標(biāo)區(qū)域坐標(biāo)。確保標(biāo)記清晰可見，便于后續(xù)操作。

 

　　開孔操作

 

　　使用顱骨鉆孔器，在標(biāo)記點(diǎn)處緩慢鉆孔，注意控制力度和速度，避免損傷下方腦組織。同時，利用冷卻系統(tǒng)減少熱損傷風(fēng)險。

 

　　四、微注射操作

 

　　注射器準(zhǔn)備

 

　　根據(jù)實驗需求選擇合適規(guī)格的注射器，并精確量取所需藥物或標(biāo)記物。連接注射器至微注射泵，設(shè)定流速參數(shù)。

 

　　注射過程

 

　　緩慢推進(jìn)注射針頭進(jìn)入預(yù)定深度，啟動微注射泵進(jìn)行微量注射。密切觀察注射過程中的壓力變化，確保液體均勻注入目標(biāo)區(qū)域。